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禽波氏桿菌PCR試劑盒試驗原理:
禽波氏桿菌PCR試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進(jìn)行檢測。先將生物素標記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
禽波氏桿菌PCR試劑盒安全性:
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4. 禽波氏桿菌PCR試劑盒應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄,不可保存。
5. 實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
8. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9. 洗滌酶標板時(shí)應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
10. 底物A應揮發(fā),避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。
11. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
12. 按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
禽波氏桿菌PCR試劑盒操作程序:
1. 棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。
3. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
4.測定:以空白孔調零,在450nm波長(cháng)下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
5.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用禽波氏桿菌PCR試劑盒各種應用軟件來(lái)計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應該乘以總稀釋倍數。