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免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)又稱(chēng)免疫細胞化學(xué),是根據抗原抗體反應和化學(xué)顯色原理,組織切片或細胞標本中的抗原和一抗結合,再利用一抗與標記生物素的二抗進(jìn)行反應,前者再用標記辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素)結合,最后通過(guò)呈色反應在光學(xué)顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細胞內發(fā)生的抗原抗體反應物,從而原位確定特定蛋白質(zhì)的分布和含量。免疫組化,是應用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過(guò)化學(xué)反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究。想要在做完實(shí)驗評判結果,現教您三種方法,簡(jiǎn)單易學(xué),方便快捷,一起來(lái)看看吧!
(1)陽(yáng)性著(zhù)色細胞計數法
在40光鏡下,隨機選擇不重疊的10個(gè)視野,人工或機器計數陽(yáng)性著(zhù)色細胞,每組3~6張不同動(dòng)物組織切片,然后進(jìn)行組間比較即可。
(2)灰密度分析法
通過(guò)在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析,然后進(jìn)行統計分析即可。
(3)評分法
通過(guò)在光學(xué)顯微鏡下對組織切片分別按染色程度(0~3分為陰性著(zhù)色、淡黃色、淺褐色、深褐色)、陽(yáng)性范圍進(jìn)行評分(1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),終了時(shí)可以分數相加,再進(jìn)行比較。
對于以上這幾種方法,各有利弊,請細心選擇。要想得到正確結果的前提是您要做出著(zhù)色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。