簡(jiǎn)述白色念珠菌PCR試劑盒反應的要素
點(diǎn)擊次數：669 更新時(shí)間：2022-07-26
白色念珠菌PCR試劑盒因其操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好，經(jīng)濟安全等特點(diǎn)而在臨床上廣泛應用，但是由于其操作步驟復雜，一般包括試劑準備，樣本收集，加樣，溫育，洗滌，顯色，比色，結果判定等，其中任何一項操作不當都會(huì )對檢測結果產(chǎn)生很大影響。
今天咱們來(lái)了解下白色念珠菌PCR試劑盒反應的要素：
引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
1、引物長(cháng)度：15-30bp，常用為20bp左右。
2、引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長(cháng)至10kb的片段。
3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過(guò)多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
4、避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會(huì )形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
5、引物3'端的堿基，特別是最末及倒數第二個(gè)堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
6、引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)，這對酶切分析或分子克隆很有好處。
7、引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無(wú)明顯同源性。
8、引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會(huì )引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會(huì )。
