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ELISA試劑盒的使用標準分享
點(diǎn)擊次數:625 更新時(shí)間:2023-01-16

  ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì ),只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。

  這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點(diǎn)。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時(shí)間的溫育。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),產(chǎn)物的生成可達ding 峰。

  為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反應4℃更為徹di,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中放置一晚,以形成最多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(cháng),在ELISA試劑盒實(shí)驗中一般不予采用。

若用保溫箱,ELISA試劑盒的ELISA板應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,最后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)候更應如此。無(wú)論是水浴還是濕盒溫育,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。


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